当前位置:主页 > 新闻追踪 >

新闻追踪

植物组织中淀粉酶含量的测量

发布时间:2019-01-30 10:25
活性I-淀粉酶和淀粉酶的测定。
【实验原理】
淀粉酶包括几个成员不同的催化性能,淀粉酶,其中随机行为糖苷键-1.4淀粉以在淀粉的非还原端麦芽糖和糊精,淀粉酶和行为 -1.4。糖苷键,每当它从淀粉的非还原端切割麦芽糖分子时,它也被称为糖基化酶。葡糖淀粉酶每次从淀粉的非还原端切割一个葡萄糖。
由淀粉酶产生的这些还原糖,可以形成通过减少3,5-二硝基水杨酸3-氨基-5-硝基 - 水杨酸红棕色。
淀粉酶活性的大小与产生的还原糖的量成正比。
标准曲线可以利用麦芽糖和减少由可通过比色方法测定淀粉产生的糖的量来创建和每个样品随时间的单位重量产生的还原糖金额显示活动。酶
淀粉酶几乎存在于所有植物中,特别是发芽谷物的种子具有最强的淀粉酶活性,主要是淀粉酶。
- 淀粉酶在pH 3时不耐受酸。
淀粉酶不耐热,最快钝化小于6,同时在70℃下钝化15分钟。
根据其特征,可以首先测量淀粉酶的活性(+),然后可以使其中一种失活以测量其他活性。
在该实验中,淀粉酶的活性的热钝化 - 由淀粉酶和淀粉酶的活性测定是通过用的非钝化状态的总酶活性的比较来确定。
[设备和试剂]
1
实验室仪器分光光度计,恒温水浴,离心机,刻度试管,刻度量秸秆,母瓶。
2
麦芽糖的反应性实验标准溶液(100微克/毫升)(正好是100毫克麦芽糖,溶解于蒸馏水中并稀释至100毫升,10毫升,稀释至100毫升,用蒸馏水),3,5-二硝基水杨酸试剂(3,5-二硝基水杨酸1克精确称量,2摩尔/ L溶解在NaOH溶液20毫升,蒸馏水加入50ml,加入100ml英寸蒸馏水加入酒石酸钠钾30克。
请关闭盖子,确保CO2不会进入。
如果溶液是泥泞的,可以过滤和使用),0。
1 mol / L pH 5。
6柠檬酸盐缓冲液(参见附录中的表2),1%淀粉溶液(1克淀粉的重量溶于100毫升)。
1 mol / L pH 5。
6.在柠檬酸盐缓冲液6)中,0。
4 mol / L NaOH溶液。
3
发芽小麦种子的实验材料
[实验程序]
1
粗酶溶液的制备:称重1。
0克发芽小麦种子中的2条3天,除了砂浆加入1ml在匀浆蒸馏水和石英砂的量小,地面,转移到离心管,在5毫升蒸馏水洗涤残余物在管离心,室温下提取,放置渗滤液15-20分钟,摇匀,完全去除。
然后,离心分离10分钟,在3000转/分,倾倒上清液容量瓶50毫升,稀释至用蒸馏水体积,充分摇匀。这是淀粉酶母液。
将1ml淀粉酶储备液移入50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度并搅拌淀粉酶。
2
绘制麦芽糖的标准曲线:?7取干净带盖试管(?数量1 7),标准麦芽糖溶液(100微克/毫升)稀释,以按照下表用0 100微克/毫升标准溶液(0)。向每个管中加入5,5二硝基水杨酸,充分摇匀,在沸水浴中煮5小时令。几分钟后,取出水然后不行。冷却到1。在零波长和540nm波长下测量管作为比色分析。
在横坐标上绘制麦芽糖的浓度,在纵坐标上绘制吸光度。绘制标准曲线或创建回归方程。
表5-4标准麦芽糖溶液的制备